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乳酸菌飲料中乳酸菌的微生物學檢驗


錄入時間:2006-6-26 9:06:10 來源:其它

   
   【GB/T 16347—1996】 
乳酸菌飲料中乳酸菌的微生物學檢驗 
  1 主題內容與適用范圍
  本標準規定了乳酸菌飲料中乳酸菌檢驗的技術要求。
  本標準適用于以鮮乳、乳粉或輔以大豆等為原料,經乳酸菌發酵加工制成的具有相應風味的活性乳酸菌飲料。
  2 引用標準
  GB 4789.28 食品衛生微生物學檢驗 染色法、培養基和試劑
  3 術語
  乳酸菌:一群能分解葡萄糖或乳糖產生乳酸,需氧和兼性厭氧,多數無動力,過氧化氫酶陰性,革蘭氏陽性的無芽胞桿菌和球菌。
  乳酸菌菌落總數:檢樣在一定條件下培養后,所得1mL檢樣中所含乳酸菌菌落的總數。
  4 設備和材料
  4.1 溫箱:36±1℃。
  4.2 冰箱:0~4℃。
  4.3 恒溫水浴:46±1℃。
  4.4 電爐:可調式。
  4.5 吸管:容量為1,10和25mL。
  4.6 廣口瓶或三角瓶:容量為500mL。
  4.7 平皿:直徑為9cm。
  4.8 試管:18×180mm。
  4.9 顯微鏡。
  5 培養基和試劑
  5.1 改良TJA培養基(改良番茄汁瓊脂培養基)。
  5.2 改良MC培養基(Modified Chalmers培養基)。
  5.3 0.1%美蘭牛乳培養基。
  5.4 6.5%氯化鈉肉湯。
  5.5 pH9.6葡萄糖肉湯。
  5.6 40%膽汁肉湯。
  5.7 淀粉水解培養基。
  5.8 精氨酸水解培養基。
  5.9 乳酸桿菌糖發酵管。
  5.10 七葉苷培養基。
  5.11 革蘭氏染色液:按GB 4789.28規定執行。
  5.12 3%過氧化氫溶液:按GB 4789.28規定執行。
  5.13 蛋白胨水、靛基質試劑:按GB 4789.28規定執行。
  5.14 明膠培養基:按GB 4789.28規定執行。
  5.15 硝酸鹽培養基、硝酸鹽試劑:按GB 4789.28規定執行。
  5.16 生理鹽水:定量分裝于三角瓶和試劑管內滅菌。
  6 乳酸菌菌落總數的測定  
  6.1 檢驗程序
  乳酸菌菌落總數檢驗程序如下:
  (略)
  6.2 操作步驟
  6.2.1 以無菌操作將經過充分搖勻的檢樣25mL(或25g)放入含有225mL滅菌生理鹽水的滅菌廣口瓶內作成1∶10的均勻稀釋液。
  6.2.2 用1mL滅菌吸管吸取1∶10稀釋液1mL,沿管壁徐徐注入含有9mL滅菌生理鹽水的試管內(注意吸管尖端不要觸及管內稀釋液)。
  6.2.3 另取1mL滅菌吸管,按上述操作順序,作10倍遞增稀釋液,如此每遞增一次,即換用1支1mL滅菌吸管。
  6.2.4 選擇2~3個以上適宜稀釋度,分別在作10倍遞增稀釋的同時,即以吸取該稀釋度的吸管移1mL稀釋液于滅菌平皿內,每個稀釋度作兩個平皿。
  6.2.5 稀釋液移入平皿后,應及時將冷至50℃的乳酸菌計數培養基(改良TJA或改良MC)注入平皿約15mL,并轉動平皿使混合均勻。同時將乳酸菌計數培養基傾入加有1mL稀釋液檢樣用的滅菌生理鹽水的滅菌平皿內作空白對照,以上整個操作自培養物加入培養皿開始至接種結束須在20min內完成。
  6.2.6 待瓊脂凝固后,翻轉平板,置36±1℃溫箱內培養72±3h取出,觀察乳酸菌菌落特征(見表1),選取菌落數在30~300之間的平板進行計數。計算后,隨機挑取5個菌落數進行革蘭氏染色,顯微鏡檢查并做過氧化氫酶試驗。革蘭氏陽性,過氧化氫酶陰性,無芽胞的球菌或桿菌可定為乳酸菌。根據證實為乳酸菌菌落計算出該皿內的乳酸菌數,然后乘其稀釋倍數即得每毫升樣品中乳酸菌數。例如,檢樣10-4的稀釋液在改良TJA瓊脂平板上,生成的可疑菌落為35個,取5個鑒定,證實為乳酸菌的是4個,則1mL檢樣中乳酸菌數為:
   
  6.3 乳酸菌在改良TJA和改良MC培養基上菌落生長形態特征見表1。
  表1 乳酸菌在不同培養基上菌落特征
  (表略)
  7 乳酸菌的鑒定
  對上述分離到的乳酸菌需進行菌種鑒定時,則作以下試驗。
  7.1 菌種制備:自平板上挑取菌落,接種于改良TJA或改良MC瓊脂斜面,于36±1℃,24~48h培養,刮取菌苔,分別進行下列試驗。
  7.2 乳酸桿菌鑒定試驗:極少見還原硝酸鹽,不液化明膠,不產生靛基質和硫化氫。
  7.3 常見乳桿菌屬內種的碳水化合物反應,見表2。
  7.4 產乳酸的鏈球菌的鑒別試驗,見表3。
  表2 常見乳桿菌屬內種的碳水化合物反應
  (表略)
  表3  乳酸的鏈球菌的鑒別表
  (表略)

 

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